Introducción: La leptospirosis es una zoonosis de distribución mundial, está presente tanto en zonas rurales como urbanas, es causada por la bacteria Leptospira interrogans, afecta tanto a animales domésticos como silvestres. OBJETIVO. Determinar la prevalencia de infección por L. interrogans en roedores de la ciudad de Campeche. Material y métodos: Se capturaron roedores utilizando trampas Sherman. Los roedores capturados se sacrificaron con éter etílico, se les extrajo los riñones, trituraron y sembraron en medio líquido EMJH y semisólido de Fletcher, los cultivos se incubaron a 30 °C y se observaron por microscopía de campo oscuro; se realizó la técnica de PCR empleando los oligonucleótidos G1 y G2 para detectar ADN de Leptospira en riñón. Resultados: Se capturaron 24 roedores de la especie Rattus norvegicus.La prevalencia a Leptospira fue del 20.63%; el 37.5% (9/24) de las ratas se capturaron en el interior de las viviendas, en el 22% (2/9) de esas ratas se detectó ADN deLeptospira;de las ratas capturadas en el exterior de las viviendas el 20% (3/15) presentó ADN de Leptospira. Todos los cultivos fueron negativos. Conclusiones: La presencia de ratas infectadas con Leptospira en zonas urbanas representa un riesgo potencial en salud pública. Por lo que se sugiere ampliar el estudio para conocer la prevalencia real de infección.